服務(wù)簡(jiǎn)介

慢病毒( Lentiviruses)屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒科。慢病毒核蛋白質(zhì)前整合復(fù)合物具有噬核特性，病毒基因組運(yùn)輸至細(xì)胞核，從而使慢病毒可以感染和在非有絲分裂細(xì)胞中復(fù)制。這一特性使得慢病毒成為基因治療的常用轉(zhuǎn)移載體，慢病毒載體對(duì)分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞均具有感染能力，病毒基因組整合于宿主基因組，可長(zhǎng)時(shí)間、穩(wěn)定表達(dá)外源基因。

  慢病毒載體（Lentiviral vector）較逆轉(zhuǎn)錄病毒載體有更廣的宿主范圍，慢病毒能夠有效感染非周期性和有絲分裂后的細(xì)胞。慢病毒載體能夠產(chǎn)生表達(dá)siRNA的高滴度的慢病毒，在周期性和非周期性細(xì)胞、干細(xì)胞、受精卵以及分化的后代細(xì)胞中表達(dá)siRNA/miRNA，實(shí)現(xiàn)在多種類型的細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因小鼠中特異而穩(wěn)定的基因表達(dá)的功能性沉默，為在原代的人和動(dòng)物細(xì)胞組織中快速而高效地研究基因功能，以及產(chǎn)生特定基因表達(dá)降低的動(dòng)物提供了可能性

 技術(shù)流程

  1、含目的基因的慢病毒載體的構(gòu)建和純化提取；

  2、慢病毒表達(dá)載體PLVX，骨架質(zhì)粒PLD2、PLD3，在脂質(zhì)體LP2000作用下，三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞；

  3、培養(yǎng)48~72h，收集培養(yǎng)上清；

  4、病毒的純化和濃縮（超離和/或超濾）；

  5、滴度測(cè)定、目的基因檢定；

  6、將制得的慢病毒液轉(zhuǎn)導(dǎo)客戶的靶細(xì)胞，篩選混合穩(wěn)定細(xì)胞株，并檢測(cè)靶基因的表達(dá)

  1、所要表達(dá)的外源基因名稱或序列和所要選擇的穿梭載體

  2、提供重組后的慢病毒載體質(zhì)粒

  3、附上重組成功的酶切鑒定結(jié)果及對(duì)目的基因的PCR鑒定結(jié)果。

 成果展示

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